激光掃描共聚焦顯微鏡(ConfocallaserscanningmicroscopeCLSM)近代先進細胞物醫析儀器目前激光掃描共聚焦顯微技術已用于細胞形態定位、立體結構重組、態變化程等研究并提供定量熒光測定、定量圖像析等實用研究手段結合其相關物技術形態、理、免疫、遺傳等細胞物領域廣泛應用。 1.組織細胞定量熒光測定激光掃描共聚焦顯微鏡固定熒光染色標本單波、雙波或波模式單標記或標記細胞及組織標本共聚焦熒光進行數據采集定量析,同利用沿縱軸移標本進行光切片疊加形組織或細胞熒光標記結構總體圖像,顯示熒光形態結構精確定位用于原位雜交、腫瘤細胞凋亡觀察、單細胞水平DNA損傷及修復等定量析。
2.細胞間通訊研究物植物細胞縫隙連接介導胞間通信細胞增殖化起著重要作用激光掃描共聚焦顯微鏡通觀察細胞縫隙連接轉移測量傳遞細胞調控信息些離、物質該技術用于研究胚胎發、殖發育、神經物、腫瘤發等程縫隙連接通訊基本機制作用用于鑒別縫隙連接作用潛毒性化物質
3.細胞物理化測定激光掃描共聚焦顯微鏡細胞形狀、周、面積、平均熒光強度及細胞內顆粒數等參數進行自測定能細胞溶酶體、線粒體、內質中國、細胞骨架、結構性蛋白質、DNA、RNA、酶受體等細胞內特異結構含量、組及布進行定量、定性、定及定位測定4.細胞內鈣離pH值態析激光掃描共聚焦顯微鏡技術測量若干種離濃度并顯示其布效工具焦點信息效辨別使亞細胞水平顯示離布能利用熒光探針激光掃描共聚焦顯微鏡測量單細胞內pH種離(Ca2+、K+、Na+、Mg2+)細胞內濃度及變化般說電理記錄裝置加攝像技術檢測細胞內離量變化速度相較快,其圖像本身價值較低,激光掃描共聚焦顯微鏡提供更亞細胞結構鈣離濃度態變化圖像,于研究鈣等離細胞內力意義
4.三維圖像重建傳統顯微鏡能形二維圖像激光掃描共聚焦顯微鏡通同品同層面實掃描像進行圖像疊加構品三維結構圖像優點品立體結構析能十靈、直觀進行形態觀察,并揭示亞細胞結構空間關系
5.熒光漂白恢復技術該原理細胞內熒光激光漂白或淬滅失發光能力鄰近未漂白細胞熒光通縫隙連接擴散已漂白細胞熒光逐漸恢復通觀察已發熒光漂白細胞其熒光恢復程變化量析細胞內蛋白質運輸、受體細胞膜流組裝等細胞物程。
6.程觀察細胞遷移細胞觀察通需要定加熱裝置及灌注室保持培養液適宜溫度及CO2濃度恒定目前激光掃描共聚焦顯微鏡其光產效率已改善與更亮物鏡更光毒性染料結合減每掃描激光束細胞損傷,用于數程定掃描,記錄細胞遷移等細胞物現象。
7.細胞及物基礎研究應用激光掃描共聚焦顯微鏡應用照明針與檢測孔共軛像效抑制焦外模糊像并標本各層別像細胞行損傷光切片種功能形象稱顯微CTCLSM貼壁單細胞或細胞群胞內、胞外熒光作定位、定性、定量及實析并胞內線粒體、內質中國、高爾基體、DNA、RNA、Ca2+、Mg2+、Na+等布、含量等進行測定及態觀察使細胞結構功能面研究達水平。
8.腫瘤抗癌藥物篩選研究應用普通顯微鏡及電顯微鏡僅能腫瘤相關抗原進行定性析CLSM則單標記或者標記細胞、組織標本及細胞進行重復性熒光定量析腫瘤細胞抗原表達、細胞結構特征抗腫瘤藥物作用及機制等面定量化。
9.血液病醫免疫研究應用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察免疫細胞系統樹突狀細胞、單核-吞噬細胞系統、傷細胞、淋巴細胞準確細胞定位同效鑒定免疫細胞性質。
10.腦神經科應用激光掃描共聚焦顯微鏡層掃描發現神經軸突內部結構連續性用激光掃描共聚焦顯微鏡能觀察腦干組織神經軸突走向排除熒光顯微鏡由造些病理假象并且激光掃描共聚焦顯微鏡能觀察神經軸突三維結構應用CLSM能觀察普通光鏡未能發現神經組織細微病變。
11.眼科研究應用利用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察晶狀體角膜、視中國膜、虹膜睫狀體結構病理變化。
12.骨科研究領域應用激光掃描共聚焦顯微鏡骨科研究領域應用現狀表明CLSM觀測骨細胞形態研究、骨細胞特異性蛋白(骨鈣素)及骨細胞間相互作用具顯著優勢。